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2022

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預(yù)混or非預(yù)混，RNA建庫試劑盒，你pick哪個呢？

該步驟對片段化后的RNA進行逆轉(zhuǎn)錄，預(yù)混版RNA建庫，只需要將1st模塊試劑加入片段化后的RNA即可進行PCR，而非預(yù)混RNA建庫試劑盒，需要分開添加1st逆轉(zhuǎn)錄酶和1st逆轉(zhuǎn)錄酶buffer。

01
1st cDNA合成

該步驟對片段化后的RNA進行逆轉(zhuǎn)錄，預(yù)混版RNA建庫，只需要將1st模塊試劑加入片段化后的RNA即可進行PCR，而非預(yù)混RNA建庫試劑盒，需要分開添加1st逆轉(zhuǎn)錄酶和1st逆轉(zhuǎn)錄酶buffer。

02
2nd合成步驟

該步驟承接1st cDNA合成步驟進行二鏈互補鏈合成以及末修、加A等步驟。預(yù)混版RNA建庫試劑盒，只需要將完成1st cDNA PCR步驟的試劑拿出，直接加入2nd 合成試劑即可進行下步PCR操作，而非預(yù)混RNA建庫試劑盒，需要分開添加2nd合成buffer和酶。

03
接頭連接步驟

該步驟承接2nd二鏈合成步驟，進行后續(xù)接頭連接。預(yù)混版RNA建庫試劑盒，只需要加入接頭連接模塊和接頭，即可進行接頭PCR過程，而非預(yù)混版RNA建庫試劑盒，需要分開添加連接酶、連接buffer以及接頭。

 

后續(xù)PCR擴增和文庫分選、文庫定量等步驟，操作流程類型，此處不再進行贅述。整體看來，預(yù)混版RNA建庫試劑盒，不論是操作時間，還是操作的便捷度上，都有非常大的優(yōu)勢。尤其是在自動化建庫時，這種便捷度，能大大提高自動化效率。